六锐信息
六锐视野
六锐功效
市场动态
医患之声
真伪查询
 
六锐胶囊对葡萄膜炎大鼠血清SOD、MDA和NT-3的影响
    更新时间:2015-12-24 查看次数:916
六锐胶囊对葡萄膜炎大鼠血清SOD、MDA和NT-3的影响
郭俊国  赵晴  王兴荣  毕宏生
作者简介:郭俊国,男,1980年6月出生,山东高唐人,讲师,联系电话:0531-58859696;E-mail:guojunguo111@163.com
基金项目:山东省重点研发计划项目资助(编号:2015GGH319001)
作者单位:250002,山东省济南市,山东中医药大学眼科研究所(郭俊国,王兴荣,毕宏生);250002,山东省济南市,山东省中西医结合眼病防治重点实验室(郭俊国,王兴荣,毕宏生);250355,山东省济南市,山东中医药大学(赵晴)
通讯作者:毕宏生,E-mail:hongshengbi1@163.com
About Guo Junguo: Male, born in June, 1980. Lecturer, Tel: 0531-58859696; E-mail:guojunguo111@163.com
Key Words: Uveitis, Liurui capsule, Serum, Superoxide Dismutase, Malondialdehyde, Neurotrophin -3
Effects of Liurui capsules on uveitis in rats serum SOD, MDA and NT-3[Abstract]Objective: To explore the effects of Liurui capsules on uveitis in rats serum superoxide dismutase (SOD), malondialdehyde (MDA) and neurotrophin-3 (NT-3). Methods: Use vitamin a class of photoreceptors-binding protein (IRBP1177-1191), uveitis in rats, after the model, 2nd day the gavage treatment was started and on the 13th day collected blood from heart. ELISA was used to detect the six sharp Capsule on antioxidant function of EAU, the SOD, MDA's expression changes and optic nerve by changes in the expression of protective effect of NT-3. Results: the levels of NT-3 and SOD in different dose group and model control group were lower than those in control group (NT-3 ), and the levels of and SOD were higher than those in model control group, and the levels of NT-3 and SOD increased with the increase of Liurui capsule, and the difference was statistically significant (P< 0.05). The MDA levels of Liurui capsule group and model control group were higher than those in blank control group, and the level of MDA in different dosage group was lower than that in model control group, and the level of MDA increased with the increase dose of Liurui capsule, and the difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion: Liurui capsule can increase the serum SOD and NT-3 levels, reduce the level of serum MDA, has antioxidant and neuroprotective effect.
[关键词]六锐胶囊,葡萄膜炎,血清,超氧化物歧化酶,丙二醛,神经营养素-3
 
[摘要]目的:探讨六锐胶囊对葡萄膜炎大鼠血清超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、丙二醛(Malonaldehyde,MDA)和神经营养素-3(Neurotrophin-3NT-3)的影响。方法:采用光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP1177-1191)制备葡萄膜炎大鼠模型,造模第2天开始给药,第13天心脏取血,采用ELISA检测六锐胶囊对EAU大鼠抗氧化作用SOD、MDA的表达变化和视神经保护作用NT-3的表达变化。结果:六锐胶囊不同剂量组、模型对照组的SOD和NT-3水平低于空白对照组,六锐胶囊不同剂量组的SOD 和NT-3水平高于模型组,且随六锐胶囊剂量的增加,SOD和NT-3水平增加,差异有统计学意义(P<0.05)。六锐胶囊不同剂量组、模型对照组的MDA水平高于空白对照组,六锐胶囊不同剂量组的MDA水平低于模型对照组,且随六锐胶囊剂量的增加,MDA水平上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:六锐胶囊可增加葡萄膜炎大鼠血清SOD 和NT-3水平,降低血清MDA水平,具有抗氧化和视神经保护作用。
 
葡萄膜炎是眼科常见的、反复发作的严重致盲性眼病,发病率高危害性大,在病理上存在葡萄膜、视网膜、视网膜血管及玻璃体的炎症。在我国大约有400万同胞罹患此病,并且具有持续上升的趋势[1-2]。葡萄膜炎的一个显著特点是炎症反应常呈慢性、复发性,因此在治疗上相当棘手[3]。目前,西医主要靠长期大剂量糖皮质激素及免疫抑制剂治疗,易导致许多全身或眼部的严重并发症。中医药治疗葡萄膜炎具有明显的优势,尤其对西药治疗无效的葡萄膜炎患者更具优势[4]。六锐胶囊主要由六种藏药药物组成,诃子、红花、巴夏嘎、木香、安息香、人工麝香。六锐胶囊目前已经应用在临床并已取得了一定的疗效,主要用于血、胆、疬引起的头痛病,云翳等眼科疾病,旨在清热凉血,明目退翳[5-6]。本研究光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP1177-1191)制备葡萄膜炎大鼠为模型,探讨六锐胶囊对葡萄膜炎大鼠血清超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、丙二醛(Malonaldehyde,MDA)和神经营养素-3(Neurotrophin-3NT-3)的影响。

1  材料与方法

1.1  实验材料  6~8周雌性Lewis大鼠,体重160~180g,由北京维通利华实验动物有限公司提供(动物许可证号:SCXK(京)2006-0009);六锐胶囊(西安大唐制药集团有限公司提供国药准字:Z20090461);IRBP(1177-1911,氨基酸序列:ADGSSWEGVGVVPDV)购于上海生工生物工程股份有限公司合成;完全弗氏佐剂(Complete Freund’s adjuvant, CFA)购于美国sigma公司;结核分枝杆菌H37RA(mycobacteriumTuberculosis, TB)美国Difco公司。SOD、MDA和NT-3试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。Biotek Elx800酶标仪(美国Bio-Tek仪器公司),所有实验均符合ARVO对于动物在眼睛和视觉方面应用的要求。
1.2模型制备  将40Leweis只雌性大鼠,随机分为5组,每组各8只,分为空白对照组,模型对照组和六锐胶囊低中高剂量组5组。进行1周适应饲养后模型对照组和六锐胶囊低中高剂量组4组,在大鼠腹腔内注射10%水合氯醛注射液(0.5ml/100g)进行全身麻醉,皮下注射300μl含有100μgIRBP1177-1191,150μl完全弗氏佐剂,100μg TB及150μl PBS的乳化液,在两足垫处、尾根部两侧及脊背正中均匀注射5点[7]
1.3 给药方式与方法  免疫后第2天开始用药,空白对照组和模型对照组给予2mL的生理盐水,六锐胶囊低中高剂量组分别给予含0.4g、0.8g和1.2g六锐胶囊的2mL药液。连续灌胃给药12天。
1.4 指标检测 于免疫后第13天心脏取血4mL,3000 r/min的速度离心15 min,分离血清,-80℃保存待测。参照SOD、MDA和NT-3试剂盒说明书,采用用酶联免疫吸附法在450nm处测OD值,计算其浓度。
1.5 统计分析  采用SPSS19.0进行统计数据分析,计量资料以(±S)表示,采用t检验比较组内和组间差异,P<0.05为具有统计学意义的检验标准。

2 结果

2.1 各组大鼠血清SOD的比较  空白对照组大鼠血清SOD含量水平最高,模型对照组血清SOD含量水平最低,随六锐胶囊剂量的增加,血清SOD含量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
表1 葡萄膜炎大鼠血清SOD、MDA和NT-3比较(±S)
组别
只数
SOD(U/mL)
MDA(nmol/mL)
NT-3(μg/mL)
空白对照组
8
180.12±12.36
3.62±0.13
103.25±14.82
模型对照组
8
119.37±8.91
10.81±1.03
63.58±7.61
六锐胶囊低剂量组
8
136.52±9.78
9.18±0.76
79.35±8.61
六锐胶囊中剂量组
8
153.27±10.67△★
7.21±0.56△★
86.91±9.13△★
六锐胶囊高剂量组
7
168.79±11.36△★
4.83±0.27△★
97.28±11.29△★
注:与空白对照组比较,P<0.05;与模型对照组比较,P<0.05;与六锐胶囊低剂量组比较,P<0.05;与六锐胶囊中剂量组比较,P<0.05。
2.2 各组大鼠血清MDA的比较  空白对照组大鼠血清MDA含量水平最低,模型对照组血清MDA含量水平最高,随六锐胶囊剂量的增加,血清MDA含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
2.3 各组大鼠血清NT-3的比较  空白对照组大鼠血清NT-3含量水平最高,模型对照组血清NT-3含量水平最低,随六锐胶囊剂量的增加,血清NT-3含量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

3讨论

葡萄膜炎病因不清,感染、外伤等多种因素均可引起葡萄膜炎,近来认为自身免疫紊乱可能参与了疾病诱导。目前葡萄膜炎尚无理想治疗方法,其治疗主要是非甾体消炎药和糖皮质激素等免疫抑制剂,往往常会导致许多严重的并发症。祖国医学将葡萄膜炎称为“瞳神紧小”。其发病机理是:肝胆火炽、热毒亢盛、火邪燔灼循经上传、上犯于目或挟风、热、痰、湿所致[8]。用中药从整体水平进行调理,使机体重新达到阴阳平衡,具有良好的治疗作用[9]。六锐胶囊主要由六种藏药药物组成,诃子、红花、巴夏嘎、木香、安息香、人工麝香。六锐胶囊目前已经应用在临床并已取得了一定的疗效,主要用于血、胆、疬引起的头痛病,云翳等眼科疾病,旨在清热凉血,明目退翳。现代药理学研究证明[10-11],六锐胶囊中的有效成分没食子酸具有抗氧化、抗病毒和抗血小板聚集等作用,藏红花提取液是经自由基与超氧自由基的强效清除剂,能够抗氧化反应,改善线粒体功能,抑制视神经细胞凋亡。结合六锐胶囊的临床应用,我们推测六锐胶囊具有抗氧化和视神经保护作用。因此,本研究探讨六锐胶囊对葡萄膜炎大鼠血清SOD、MDA和NT-3的影响,为临床治疗提供依据。
氧化应激是葡萄膜炎发病的机制之一,氧化应激是指机体在遭受各种有害刺激时,体内活性分子生成过多,造成体内清除氧化物不及时,从而导致细胞和组织损伤的生理和病理反应。SOD是机体清除氧自由基的主要酶类,其活性高低可以反映组织清除氧自由基的能力。MDA是脂质代谢产物,MDA含量可以反映出组织中氧自由基含量的变化以及氧自由基引起脂质过氧化程度,从而判断疾病损伤程度[12]。NT-3主要存在于中枢神经系统胶质细胞和神经元,具有支持神经儿存活、调节和维持神经儿突触功能,促进损伤神经的再生和修复等作,对多种神经元均有重要作用[13]。本研究发现,随六锐胶囊剂量的增加,血清SOD含量增加,血清MDA含量降低,血清NT-3含量增加,差异有统计学意义。说明六锐胶囊可以增加葡萄膜炎大鼠血清SOD的含量,降低MDA 的含量及增加NT-3含量。方中诃子降火、下气功效,红花活血通经、散疲止痛,巴夏嘎清热愈疮、生肌止血、活血明目之功效,木香及安息香的补气止痛、促运气血、调中导滞之功效相关[14]。现代药理研究表明,六锐胶囊可显著改善血液粘稠度,促进毛细血管通透性恢复正常,增强毛细血管杭炎作用。六锐胶囊可增强机体的抗氧化能力,调节机体的免疫状态,促进葡萄膜炎症的消退,提高患者的视功能密切相关[15]
综上所述,六锐胶囊可增加葡萄膜炎大鼠血清中SOD和NT-3的含量,降低血清MDA 的含量,具有抗氧化和保护视神经的功效。

参考文献

[1] 郭俊国,毕宏生,解孝锋. 中西医结合治疗前葡萄膜炎临床文献评价[J]. 山东中医药大学学报,2012,(2): 97-99.
[2]  解孝锋,郭俊国,毕宏生,李丽丽.清开灵滴眼液治疗慢性葡萄膜炎的临床观察[J].国际眼科杂志,2010,10(6):1171-1172.
[3] 周丹,毕宏生,魏丽娟,解孝锋.中医滋阴兼以活血法在复发性葡萄膜炎中的临床应用[J].国际眼科杂志,2010,10(5):966-967.
[4] 毕宏生,解孝锋,吴建峰.中医药综合治疗葡萄膜炎临床评价分析[J].国际眼科杂志,2009,09(4):749-751.
[5] 武向锋,刘俊,沈娟,魏立平.六锐胶囊的质量标准研究[J].解放军药学学报,2009,25(5):410-414.
[6] 兰薇,王世祥,房敏峰,骆凯,杨洁,郑晓晖.蒙药广枣中没食子酸在正常和气滞血瘀家兔体内的药代动力学研究[J].中国民族医药杂志,2007,13(6):48-49.
[7] 李洋,崔彦,毕宏生.实验性自身免疫性葡萄膜炎动物模型[J].国际眼科纵览,2011,35(4):263-266.
[8]  唐凯,郭大东,张莲,司俊康,杜宇翔,毕宏生.龙胆泻肝汤对大鼠实验性自身免疫性葡萄膜炎的治疗作用[J].眼科新进展,2015,35(4):305-309.
[9] 兰芳,何蓉蓉,姚楠,覃杨,栗原博.叶黄素对小鼠葡萄膜炎氧化应激状态的改善作用[J].中国药理学通报,2010,26(9):1257-1258.
[10] 邓颖,郭志刚,曾兆麟,王钊.藏红花的药理研究进展[J].中国中药杂志,2002,27(8):565-568.
[11] 杨婷婷,邓娟,梁雪梅.葡萄膜炎患者血清胆红素、尿酸及白蛋白浓度分析[J].眼科新进展,2014,34(4):358-360.
[12] 张震,尹玉,阎磐石.特发性葡萄膜炎患者红细胞免疫粘附功能研究[J].医药论坛杂志,2005,26(4):8-9.
[13] 张燕青,曾园山,曾湘,丁英,李燕.神经营养素-3基因修饰雪旺细胞和神经营养素-3受体基因修饰脊髓间充质干细胞联合移植促进脊髓损伤大鼠神经元存活的研究[J].中国康复医学杂志,2009,24(7):577-581,插1.
[14] 王军.六锐胶囊联合视网膜激光光凝治疗糖尿病视网膜病变临床研究[J].亚太传统医药,2015,11(12):100-102.
[15] 罗晓阳.六锐胶囊治疗眼底出血及渗出疗效探讨[J].中医眼耳鼻喉杂志,2014,4(1):22-24,37.