六锐信息
六锐视野
六锐功效
市场动态
医患之声
真伪查询
 
六锐胶囊治疗葡萄膜炎大鼠的血常规及肝肾功能的影响
    更新时间:2015-12-24 查看次数:1032
六锐胶囊治疗葡萄膜炎大鼠的血常规及肝肾功能的影响
赵晴a,郭俊国a,b,李秀岩c,王兴荣a,b,吕冬蕾a,黄杰a,毕宏生a,b*
(a 山东中医药大学,山东,济南,250355;b 山东中医药大学眼科研究所,山东省中西医结合眼病防治重点实验室,山东,济南,250002;c 黑龙江中医药大学,黑龙江,哈尔滨,150040)
[摘要]目的:探讨六锐胶囊对葡萄膜炎大鼠一般状况、血常规及肝肾功能的影响,评价六锐胶囊的安全性。方法:将40只Lewis大鼠,采用光感受器间维生素A类结合蛋白(IRBP1177-1191)制备大鼠葡萄膜炎模型,按照随机数字表法分模型对照组和六锐胶囊低中高剂量组,每组10只,另取10只大鼠作为空白对照组、模型对照组。分别于0、4、8、13天称重各组大鼠。造模第2天开始给药,第13天心脏取血,采用生化分析仪检测大鼠血清中丙氨酸氨基转换酶( ALT)、碱性磷酸酶( ALP )、门冬氨酸氨基转换酶( AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB )、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)的含量,血常规分析仪检测全血中红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、白细胞计数(WBC)、血小板(PLT)、白细胞(WBC )的含量。结果:六锐胶囊不同剂量对葡萄膜炎大鼠的体重、饮食等一般状况无明显影响,差异无统计学意义(P>0.05)。六锐胶囊低中高剂量组与空白对照组、模型对照组相比,WBC、PLT差异有统计学意义(P<0.05),模型对照组水平最高,随剂量增加逐渐水平逐渐降低,六锐胶囊组ALT、AST水平随着用药剂量的增加,各组与空白对照组比较无显著性差异(P>0.05),模型对照组ALT水平与空白对照组差异有统计学意义(P<0.05),肾功能指标BUN、CRE各组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:六锐胶囊可增加ALT、AST的水平,研究中高中低剂量组均未见明显的肝肾功能影响。。
[关键词] 六锐胶囊,葡萄膜炎大鼠,血生化,肝功能,肾功能
Effects of blood routine, liver and kidney function for Liurui capsule in treating Uveitis in rats
Zhaoqinga,Guo Junguoa, b, Li Xiuyanc,Wang Xingronga, b, Lv Dongleia, Huangjiea,Bi Hongshenga, b(a Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Shandong, Jinan, 250355; b Eye Institute of Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Key Laboratory of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine for Prevention and Therapy of Ocular Diseases in Universities of Shandong, Shandong, Jinan, 250002; Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine, Heilongjiang, Ha’erbin, 150040)
[Abstract] objective: to study the general status effects, blood routine and liver and kidney function of EAU rat treated by Liurui capsule,in order to evaluate the safety of Liurui capsule. Methods: 40 Lewis rats were divided into high, middle and low dose group of Liurui capsule and model control group with each group 10 rats according to random number table-model. The EAU rats was induced by vitamin A class of photoreceptors-binding protein (IRBP1177-1191), another 10 rats was selected as the blank control group,  The weight was record at 0, 4, 8, 13 d, respectively. The 2nd days began to drug, 13th days we collect heart blood, use the biochemical Analyzer to detect  the c ammonia acid amino conversion enzyme (ALT), and alkaline phosphate enzyme (ALP), and door winter ammonia acid amino conversion enzyme (AST), and total protein (TP), and white protein (ALB), and urea nitrogen (BUN), and muscle anhydride (CRE) of content in rats serum, use the Blood General Analyzer detection test the red blood cells count (RBC), and Red protein (HGB), and white cell count (WBC), and platelet ( PLT), white blood cells (WBC) content in the full blood. Results: Liurui capsule of different dosage of EAU rats ,the body weight, diet and other general condition had no effect (P>0.05). Compared the WBC, and PLT of the Liurui capsule in the high, middle, low dose group with blank control group, and model control group (P<0.05), model control group level is the highest, WBC and PLT reduced with dose increased gradually. Liurui capsule group with the increase of dosage, the level of ALT, AST in the group and blank control group were no significant difference (P>0.05), and the ALT levels in model group have significant differences with theblank control group (P<0.05).  kidney function index, BUN, and CRE, differences of each group have no statistics meaning (P>0.05). Conclusion: Liurui capsule can increase the levels of ALT and AST, but have no effect on liver and kidney function.
[Key words] Liurui capsule, uveitis, blood routine , liver function, kidney function
 
葡萄膜炎是眼科常见的、反复发作的严重致盲性眼病,其患病率估计为每10万人115例,在美国发病率可达52.4/10万人/年,发病率高危害性大,且多发生于青壮年[1-2]。葡萄膜炎属中医“瞳神紧小”、“瞳神干缺”、“视瞻昏渺”等范畴,中医学认为:“肝开窍于目”,肝胆互为表里,与眼相关的疾病多与肝胆有关,肝胆火炽、热毒亢盛、火邪燔灼循经上传或上犯于目挟风、热、痰等所致。目前临床上主要用糖皮质激素和免疫抑制剂治疗 ,长期应用存在较大的毒副作用[3]。中药从整体水平进行辨证论治,使机体重新达到阴阳平衡是中医药治疗葡萄膜炎的优势。六锐胶囊主要由诃子、红花、巴夏嘎、木香、安息香、人工麝香六种药物组成。六锐胶囊已广泛应用于临床,主要用于血、胆、疬引起的头痛病,云翳等眼科疾病,旨在清热凉血,明目退翳,疗效确切,但其对血常规及肝肾功能的影响鲜有报道。本实验通过观察六锐胶囊对葡萄膜炎大鼠的一般状况、血常规及血生化的影响,评价六锐胶囊对葡萄膜炎大鼠的安全性,现将结果报道如下。

1 材料和方法

1.1 材料 
6~8周雌性Lewis大鼠,体重160~180g,由北京维通利华实验动物有限公司提供(动物许可证号:SCXK(京)2006-0009);六锐胶囊(西安大唐制药集团有限公司提供国药准字:Z20090461);IRBP(1177-1911,氨基酸序列:ADGSSWEGVGVVPDV)购于上海生工生物工程股份有限公司;完全弗氏佐剂(Complete Freund’s adjuvant, CFA)购于美国sigma公司;结核分枝杆菌H37RA(mycobacteriumTuberculosis, TB)美国Difco公司;5%水合氯醛注射液,购于山东齐鲁医院,(鲁药制字H01080291);磷酸盐缓释液(PBS)购于赛默飞世尔生物化学制品(北京)有限公司;德国Sartorius电子天平;一次性无菌注射器(2ml,5ml)常州市佳峰医疗器材公司;血常规采用sysmex型号为XS-800i血常规分析仪进行检测,血液生化采用OLYMPUSAU2700生化自动分析仪进行检测。
1.2 方法
1.2.1造模方法
将50Leweis只雌性大鼠,随机分为5组,每组各10只,分为空白对照组,模型对照组,六锐胶囊高中低剂量组,进行1周适应饲养后,模型对照组、六锐胶囊高中低剂量四组5%水合氯醛腹腔注射麻醉,麻醉剂量为0.5ml/100g。按照本实验室的方法[45],在模型对照组组和六锐胶囊灌胃组每只大鼠两足底皮下、两侧腹壁及颈部皮下均匀各注射100μl混合好的乳糜液,共5点。
1.2.2给药方法与剂量
根据大鼠体重1ml/Kg。每天灌胃一次,灌胃时,左手抓住大鼠耳朵及颈部固定头部,用小指夹住尾巴,右手持灌胃器针头向下,从口角进入后,回抽无空气即可。于第二日开始灌胃。空白对照组,模型对照组给予等容量生理盐水,六锐胶囊灌胃参照文献换算系数[6]确定给药剂量。低剂量组0.4g/kg/d,中剂量组0.8g/kg/d,高剂量组1.2g/kg/d。取六锐胶囊4g、8g、12g、分别置于玻璃瓶中加三蒸水定容至100ml,置于恒温磁力搅拌器中匀速搅拌20分钟,4℃避光保存。
分别于0、4、8、13天称重各组大鼠,提前12h禁食不禁水,5%水合氯醛麻醉后心脏采血至抗凝管和促凝管,然后颈椎脱臼处死大鼠。血常规入专用抗凝血常规管中,血生化入2mL离心管中,以3000 r/min的速度离心15 min,分离血清待检。
1.2.3指标检测
一般情况观察:单笼饲养,足量水和食物,实验期间每天早晚观察动物的活动和生长情况,每四天称量大鼠。每日观察记录大鼠精神状态、活动情况、饮食、二便、毛发光泽度等。
采用血细胞分析仪检测红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、白细胞计数(WBC)、血小板(PLT)、白细胞分类等血液学指标;采集的血样于促凝管血分离血清后,于生化自动分析仪上测定血清中的丙氨酸氨基转换酶( ALT)、碱性磷酸酶( ALP )、门冬氨酸氨基转换酶( AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB )、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)等生化指标。
1. 3统计分析
采用SPSS19. 0统计软件,采用单因素方差分析对数据进行显著性检验,统计结果以(x_±s)表示,各组间的两两比较采用LSD检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1一般状况
各组大鼠在灌胃后出现轻度的不适,无死亡,各剂量组动物体质量增长较缓慢。免疫后3天各组出现精神不振和食欲减退,活动减少,毛发光亮减弱,未见脱落现象,大鼠粪便量质未见明显异常。见表1。
表1 灌胃后各组大鼠体重结果(x_±s)
组别
0天
4天
8天
13天
空白对照组
162.30±8.2
165.72±5.64
169.20±7.13
172.10±7.88
模型对照组
163.76±6.65
159.25±8.01
167.53±5.20
169.50±7.37
低剂量组
160.04±6.70
161.75±4.57
163.26±5.19
166.00±2.58
中剂量组
156.50±9.43
156.20±8.24
164.32±3.59
171.16±9.09
高剂量组
165.25±5.91
162.00±8.72
162.25±6.80
167.00±9.16
 
2.2血常规检测结果
高、中、低剂量组分别与空白对照组与模型对照组比较NEUT、RBC差异无统计学意义(P>0.05)。低、中剂量WBC、PLT计数与空白对照组、模型对照组相比差异有统计学意义,高剂量组和空白对照组无统计学意义,模型对照组水平最高,且WBC、PLT随着用药剂量的增加有降低的趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。Hb低剂量组与空白对照组、模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),低剂量组数值明显降低,高、中剂量、空白对照组和模型对照组的组间差异无统计学意义(P>0.05)。随着药量的增加全血NEUT数值降低,空白对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组与模型对照组差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。
表2  灌胃后13天各组大鼠血常规检测结果 (x_±s)
组别
WBC(×109/L)
RBC(×1012/L)
PLT(×109/L)
Hb(g/L)
NEUT(×109/L
空白对照组
7.64±3.59
6.79±0.76
349.63±17.82
129.4±7.72
12.23±2.11
模型对照组
15.67±1.55*
7.28±0.87
891.67±28.52*
125.33±9.71
14.79±1.26*
低剂量组
12.55±4.17*#
6.90±0.08
663.01±11.41*#
118.00±1.41*#
13.72±1.10#
中剂量组
11.85±1.73*#
7.27±1.67
465.75±23.91*#
128.67±1.26
12.50±1.37#
高剂量组
10.05±0.57#
7.15±0.64
450.25±20.42#
127.25±11.70
11.53± 1.03#
注:与空白对照组比较*P<0.05;与模型对照组比较#P<0.05;与六锐胶囊低剂量组比较,P<0.05。
2.3肝功能检测结果
各组间ALB 水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。低剂量组ALB 水平与空白对照组、中剂量组高剂量组差异有统计学意义(P<0.05)。六锐胶囊组ALT、AST水平随着用药剂量的增加,各组与空白对照组比较无显著性差异(P>0.05),模型对照组ALT水平与空白对照组差异有统计学意义(P<0.05)。模型对照组GLB水平与空白对照组、低剂量、中剂量、高剂量组差异有统计学意义(P<0.05),高、中、低剂量与空白对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。
表3  灌胃后13天各组大鼠血生化肝功能检测结果(x_±s)
组别
ALB(g/L)
AST(U/L)
GLB(g/L)
ALT (U/L)
空白对照组
31.23±0.45
123.32±12.32
24.21±1.20
82.00±17.70
模型对照组
30.62±1.05
121.37±24.91
17.52±2.12*
137.14±35.41*
低剂量组
28.43±1.59*
128.63±28.85
22.68±2.39#
92.12±18.22
中剂量组
32.77±0.81
121.17±23.34
25.65±2.33#
101.33±23.34
高剂量组
31.45±0.75
127.23±19.24
24.57±0.68#
94.35±20.31
注:与空白对照组比较*p<0.05,与模型对照组比较#p<0.05,与六锐胶囊低剂量组比较,P<0.05。
2.4肾功能检测结果
六锐胶囊低中高剂量组、空白对照组、模型对照组的BUN、CR水平两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。见表4。
表4 灌胃后13天各组大鼠血生化肾功检测结果(±S)
组别
BUN(mmol/L)
CRE(μmol/L)
空白对照组
8.92±1.04
44.56±12.23
模型对照组
9.42.±1.22
40.51±13.09
低剂量组
9.40±1.24
44.39±15.38
中剂量组
9.24±1.03
45.27±16.46
高剂量组
9.18±1.25
41.05±13.22
 

3讨论

葡萄膜炎是一种临床上常见的眼科疾病,病因主要有感染、外伤、免疫应答等多方面,但目前确切机制尚未完全清楚。主要进行局部治疗如糖皮质激素、非甾体抗炎药点眼治疗,同时配合全身使用免疫抑制剂治疗,病情易反复,治疗周期一般较长,易导致肥胖、股骨头坏死等严重并发症,对患者造成二次伤害。在整体观念和辨证论治的指导下中医药治疗葡萄膜炎具有很大的优势,且毒副作用小,六锐胶囊(六锐散,藏文名称为“诺乔周巴”)处方来源于《卫生部药品标准藏药第一册》[7],六锐胶囊已广泛应用于临床,疗效显著。本研究探讨六锐胶囊对葡萄膜炎大鼠一般状况、血常规、肝功能及肾功能,为临床治疗的安全性提供依据。
    本研究发现灌胃后大鼠体重增长缓慢,进食量减少,有研究认为,大鼠进食的减少可能与接受抗原免疫后大鼠对免疫抗原的反应有关[8]。本研究发现六锐胶囊对白蛋白无明显影响,球蛋白随着用药剂量的降低有所降低。球蛋白是一种具有重要的免疫调节作用的由淋巴细胞产生的血清蛋白,机体处于免疫亢进状态如发生炎症时,免疫球蛋白水平升高[9]。EAU组大鼠在免疫后13天球蛋白水平高于对照组,灌胃组大鼠血清球蛋白水平则一直处于相对稳定状态,也表明六锐胶囊能够提高机体对自身抗原的免疫应答,减轻炎症反应。天冬氨酸、丙氨酸随着用药增加有一定程度的升高,天冬氨酸主要分布于心肌和心脏,正常时含量较低,当肝细胞损伤严重时,由于通透性增加,天冬氨酸丙氨酸释放入血,血清中转氨酶升高。有研究[1011]认为木香所含的去氢木香内酷、木香醇和榄香醇可能对肝细胞有损伤作用。李刚[12]在诃子提取物以及含药血清对CCl4诱导肝细胞损伤后对细胞活力的影响中发现诃子的主成分为诃子酸、诃黎勒酸、1,3,6-三没食子酰葡萄糖等,由MTT结果显示诃子提取物0.6、0.8、1.0mg/L组中对CCl4模型组比较具有明显的保护作用。
    高中低剂量和空白对照组相比,肌酐水平无明显差异,与模型对照组有所降低,血尿素氮各组之间无明显差异。中医认为肝肾同源,肝肾两脏相互联系、相互影响。本实验结合中医药特点选取2个可反映肝肾两脏变化的生化指标。血清中BUN、CRE的含量测定是临床检测肾功能的主要指标之一。血肌酐浓度主要与机体产生、摄入及肾脏的排泄能力有关,基本不受饮食、代谢等肾外因素影响,在外源性肌酐摄入量稳定,体内肌酐生成量恒定的情况下,肌酐浓度主要取决于肾小球的滤过功能。肌酐浓度在一定程度上可准确反映肾小球滤过功能受损害程度[13]。根据本实验结果显示六锐胶囊对肾功能无明显影响。孙研的研究认为使用藏红花素后,多数肾脏空泡变性、坏死明显减少,细胞排列较顺铂组规整,肾小球和肾小管结构基本完整,未见细胞坏死及管型,与模型组比较,低、高浓度藏红花素组小鼠血清ALT、AST、BUN及Cr水平均显著降低,对顺铂引起的小鼠急性肝肾毒性具有良好的保护作用[14]
目前临床上均未观察到六锐胶囊有明显毒副作用及不良反应,与本次实验的安全性评价试验结果一致。六锐胶囊可增加ALT、AST的水平,研究中高中低剂量组均未见明显的肝肾功能影响。

参考文献

[1]Gritz DC, Wong IG. Incidence and prevalence of uveitis in Northern California; the Northern California epidemiology of uveitis study. Ophthalmology. 2004;111: 491-500
[2]Prete M, Guerriero S, Dammacco R, et al. Autoimmune uveitis: a retrospective analysis of 104 patients from a tertiary reference center. J Oph-thalmic Inflamm Infect. 2014;24(4):17
[3]Denniston AKHolland GNKidess A, et al. Heterogeneity of primary outcome measures used in clinical trials of treatments for intermediate, posterior, and panuveitis. 2015 Aug 19;10:97
[4] Boyd SR,Young S,Lightman S. Immunopathology of the Noninfectious Posterior and Intermediate Uveitides. Surv Ophthalmol. 2001; 46(3):209-233
[5] Caspi, R.R. Th1 and Th2 responses in pathogenesis and regulation of experimental autoimmune uveoretinitis. Int. Rev. Immunol. 2002 ;21(2-3):197-208
[6]黄继汉,黄晓晖,陈志扬,等.药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算.中国临床药理学与治疗学2004;9(9):1069-2501 
[7]国家药典委员会.西藏自治区药品监督管理局地方药材质量标准[S].XZ-BC-0001-2003 
[8] 刘正峰, 崔彦, 李娇, 等. 实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠的发病特点. 中华实验眼科杂志,2014; 32(7):588-592
[9] 邓伟力, 滕春燕, 汪永时. 葡萄膜炎患者的免疫球蛋白和补体C3测定与中医辨证分型的关系.中国医药学报 2002; 17(9):564.
[10]赵筱萍,陆琳,胡斌,等.木香肝毒性组分筛查与JC-MS分析研究.浙江大学学报2012;41(1):43-46
[11]Butturini E1, Cavalieri Ede Prati AC, et al.Two naturally occurring  terpenes,dehydroc;ostuslactone and costunolide, decrease intracellular GSH content and inhibit STAT3 activation.PIoS One,2011,6(5): e20174.
[12]李刚,张述禹,王玉华,等.诃子提取物及含药血清对大鼠肝细胞损伤保护作用的研究.时珍国医国药2010;21(7):1707-1709
[13]巫向前,主编.临床检验结果的评价.北京.人民卫生出版社,2000:256-360.
[14]孙妍.藏红花素对顺铂致小鼠急性肝、肾损伤的保护作用及其机制研究.青岛大学博士毕业论文.2014
 
 
 


*[基金项目]山东省重点研发计划项目资助(编号:2015GGH319001)
[通讯作者]:毕宏生,E-mail:hongshengbi1@163.com